PCR diagnostika - analýzu na infekce

Polymerázová řetězová reakce (PCR), - přesnost molekulární genetické diagnostiky, která umožňuje osobě identifikovat různé infekční a dědičné onemocnění, akutní a chronické fáze a předtím, než se nemoc může projevit.

Polymerázová řetězová reakce (PCR) v roce 1983 vyvinul Myullis Cary (USA), za který v roce 1993 byla udělena Nobelova cena za chemii.

PCR analýza pro většinu infekcí stala jakousi „zlatý standard“. Většina odborníků konfrontován s ním téměř každý den a nejsou bez definitivní diagnózy. PCR je často pouze reakce pro detekci aktivních fází choroby ve chvílích, kdy ostatní selhávají bakteriologickou, virologické a imunologické diagnostických metod.

Výhody diagnostiky PCR v moderní medicíně:

• Přímá detekce přítomnosti patogenu (tj specifické části DNA nebo RNA z patogenu) ve vzorku.
• Vysoká specificita umožňuje definovat jedinečný úsek DNA nebo RNA charakteristické pro konkrétní patogenu, což eliminuje možnost falešných poplachů.
• Vysoká citlivost metody PCR lze detekovat i jednotlivé buňky patogenů (viry, bakterie). Citlivost PCR je 10-1000 ve vzorku buňky (např., Citlivost imunologických zkoušek a mikroskopické - pouze 103 až 105 buněk).
• Vývoj Universal PCR techniky pro detekci různých patogenů. Předmětem studie pro PCR je genetický materiál (DNA, RNA) z patogenu. Metoda umožňuje identifikovat několik patogenů z biologického vzorku.
• přinést výsledky rychle dost analýza. Kompletní vyšetření se provádí po dobu 4-4,5 hodiny, nejméně - o něco déle.
• Schopnost detekovat patogeny příznaků onemocnění (preklinické Diagnostics) a přenosné nemoci (retrospektivní diagnóza). Příkladem preklinického diagnózy budou zkoumány v inkubační doby (od okamžiku infekce pokud jde o vzhled potíže pacienta), jakož i latentní infekce (pokud vůbec žádné příznaky, ale pouze laboratorních dat - PCR, například). Jedním z vrcholů PCR diagnostiky provádí PCR v archivních materiálů nebo biologických zbytků, což je důležité pro identifikaci nebo otcovství.

V současné době, PCR diagnostika prochází významný vývoj. Bude zlepšení způsobu, době stále ještě existují nové odrůdy PCR, lékařská trh dostává nový testovací systém pro tuto reakci. Tak náklady na analýzy je stále dostupnější pro širokou škálu pacientů ročně.

Co je základem metodou PCR

Základem pro polymerázové řetězové reakce se opakuje zdvojnásobení (amplifikace) z určité části DNA nebo RNA prostřednictvím enzymů in vitro. Výsledkem je množství DNA nebo RNA postačující pro vizuální analýzy. Studie se zkopíruje pouze část, která vyhovuje dané podmínky, a to pouze v případě své přítomnosti v testovaném vzorku.

Například, materiál pro tuto studii, předpokládá, že obsahuje fragmenty DNA nebo RNA z patogenu (sliny, krev, moč, výtok z genitálu) se umístí do speciálního reaktoru (termocykleru). Dále k tomu se přidá specifické enzymy, které se vážou na patogenní DNA nebo RNA, a syntézu jeho kopii. Dodává se v několika fázích typu „řetězová reakce“, a na konci jedné kopie genetického materiálu může být vytvořena a stovky tisíc kopií. Pak přijde analýzu a porovnání výsledků s dostupných databází o struktuře různých patogenů. Prostřednictvím PCR je možné nejen identifikovat typ patogenů, ale také, aby kvantitativní výsledky analýzy, která je, jak mnoho patogeny v lidském těle.

PCR je v současné době rozšiřuje okruh možností výzkumu v zavedení mutací, spojování fragmentů DNA, a široce používán v lékařství, například pro stanovení otcovství, vznik nových genů a tak dále.

Co infekce může být detekován PCR diagnostika

1) HIV infekce (dokáže detekovat viru lidské imunodeficience HIV-1)
2) virová hepatitida A, B, C, G (RNA-HAV, HBV DNA, RNA-HCV RNA-HGV)
3) infekční mononukleóza (Epstein-Barr DNA -VEB)
4) cytomegalovirus (DNA-CMV)
5) Herpes infekce (herpes simplex virus DNA HSV typ 1 a 2)
6) STI (pohlavně přenosných nemocí podle) - ureaplasmosis, bakteriální vaginóza, chlamydie, mykoplazmózy, trichomoniáza,
7) tuberkulóza (Mycobacterium tuberculosis)
8) Onkogenní Viry - papilloma virem (lidský papilloma virus (včetně jeho onkogenních typů 16, 18, 31, 33, 45, 51, 52, 56, 58, a 59)
9) borrelióza, klíšťová encefalitida
10) listerióza
11) Candida (houby Candida rodu)
12), Helicobacter infekce (Helicobacter pylori)
a další

S ohledem na rozsah patogenů, PCR diagnostika je široce používán v gynekologických, urologických praxe, praxe, infekčních chorob, pneumologii, TB, gastroenterologie, hematologie, onkologie a další.

Materiál pro studium a pravidla jejího plotu

Materiál pro analýzu PCR, které mohou identifikovat cizí DNA z bakterie nebo DNA nebo RNA viru může sloužit různou biologickou životní prostředí a lidské tekutiny: hlenu, moči, krev, sputum, škrábání epiteliální buňky, tkáně, placenta, krev, prostaty džus, plodovou vodu, pleurální tekutina.

Když screening pohlavně přenosných infekcí (STI) mezi muži a ženami jsou převzaty z pohlavních orgánů, pomlouvačné či seškrábat z děložního hrdla nebo skřípání z močové trubice (močové trubice), moč.

Při screeningu na infekci (herpes infekce, infekce CMV, mononukleóza, toxoplazmózy, hepatitida B a C, HIV) PCR odstoupit krev.

Pro diagnostiku infekční mononukleózy, cytomegalovirem infekce, herpes infekce krku výtěr je považována za screening CMV - moči. Často se pro zjišťování o nervové poškození systému v celé řadě studií přijatých mozkomíšní mok.

V Pulmonologie materiálu je sputum, pleurální tekutina.

Při screeningu na fetální infekce - plodové vody, placenta tkáně.

Příprava pro dodávání materiálu a řízení diagnostika PCR

Téměř u všech pacientů podstupujících diagnostické PCR, se mohou spolehnout na spolehlivé, přesné a rychlé výsledky, které závisí do značné míry na možnosti laboratoře, odborných laboratorních lékaři. Ve stejné době, mnozí si neuvědomují, že nejspolehlivější do značné míry závisí na sebe, a to na základě doporučení ošetřujícího lékaře, životního stylu a správnost plotového materiálu. Když plot materiál požadované podmínky bez kontaminace (znečištění) materiálu, a proto zpochybňování objektivity analýzy.

Správná příprava pro dodávku materiálu, nepředstavuje žádné obtíže. Doporučení V následujícím lékařů pro pacienty:

1) nebude mít pohlavní styk v den před datem materiala-
2) krevní pro výzkum zabýval ráno na lačný žaludek (nejíst, nepít) -
3) V době, kdy se první ranní moči se děje část do čisté sterilní nádoby.

Termíny připravenost PCR

Konečný výsledek je připravena v 1,5-2 dnů ode dne doručení materiálu. V některých případech je výsledek je připraven pro první den.

Dešifrování výsledků PCR

negativní PCR výsledek ukazuje, že testovaná látka v době dodání nebyly nalezeny žádné stopy infekčních agens. Většina těchto případů ukazuje nedostatek infekce, která se snaží najít v testovaném vzorku.

pozitivní PCR výsledek ukazuje detekci stopy infekce v testovaném biologickém vzorku. S velkou přesností pozitivní výsledek ukazuje na přítomnost infekce v daném čase.

Existují situace, kdy PCR je pozitivní, ale aktivní infekce nemůže mluvit - takzvaný „zdravý nosič“ bez klinických příznaků onemocnění, která nevyžaduje léčbu, ale vyžaduje dynamickou kontrolu ze strany lékaře. To se vyskytuje častěji v řadě virových infekcí (HPV, CMV, EBV infekce, herpes infekce, a další), v materiálech, jako jsou sliny, hřeblové děložního čípku, močovou trubici, která je, z lokální zaměření. Nicméně nesmíme zapomínat, že přenos nákazy z nosičů na zdravých lidí může jako přechod do chronické formy onemocnění s aktivačním procesem. V případě, že je pozitivní PCR v krvi, pak je bez nosiče, a vyžaduje zvláštní zacházení.

Kvantitativní PCR je hodnocena lékařem individuálně pro konkrétní infekci samostatně a nemá žádné společné přechody. Na základě výsledku kvantitativní PCR může lékař určit úroveň aktivity infekce a vystavit stádium onemocnění, což je jistě vliv na průběh a léky dávky předepsané základě.

Jedna z posledních otázek obavy: jak přesný PCR diagnostiku?

3 je definice pro PCR analýzu:

1. Přesnost (s vysokou pravděpodobností může identifikovat nebo absence infekce).
2. specifičnost (přesnost detekce určitého infekce).
3. Citlivost (i při nízkých úrovních patogenů genetického materiálu ve vzorku se detekuje infekce).

Polymerázová řetězová reakce je téměř nedává falešně pozitivní (tj, neexistuje žádný pozitivní vzorky, kde infekce je přítomen). Falešně negativní výsledky jsou vzácné (nejčastěji je to z důvodu nedostatku aktivní infekce u lidí v tomto okamžiku). Například, latentní infekci, chronické infekce je aktivní.