Analýza mozkomíšního moku (CSF)

CSF (mozkomíšní nebo mozkomíšního moku CSF) - biologická tekutina, které jsou nezbytné pro fungování centrálního nervového systému. Jeho studie je jedním z nejdůležitějších typů laboratorních testů. Skládá se z pre-analytické fázi (příprava předmětu, sběr materiálu a jeho dodání do laboratoře), analytická (vlastně dělat výzkum) a postanalytickou (přepis výsledku). Jedině správné provedení všech manipulací na každém z těchto kroků určuje kvalitu analýzy.

Mozkomíšní mok (CSF), je vytvořen v choroid plexus mozkových komor. V dospělých lidských subarhnoidalnyh mezery současně a pohybuje se v komorách mozku 110-160 ml CSF, v páteřního kanálu - 50-70 ml. Alkoholické nápoje je vytvořena kontinuálně v množství 0,2-0,8 ml / min, v závislosti na intrakraniálního tlaku. U zdravého člověka den tvořena 350-1150 ml CSF.

Louh získaný punkcí páteřního kanálu, častěji - bederní - podle metod dobře známých neurology a neurosurgeons. Jeho první kapky jsou odstraněny ( „cestovní“ krev). Potom se kapalina oddělí alespoň dvou trubek Tube v konvenčním (chemické, odstředivky) pro běžné klinické a chemické analýzy, sterilní - pro bakteriologické vyšetření. Na formuláři postoupení na vyšetření CSF lékař by měl určit nejen jméno pacienta, ale také klinické diagnózy a účel studie.

Je třeba mít na paměti, že doručena vzorků laboratorních louhu by měly být chráněny před pergrevaniya nebo chlazených a vzorky pro detekci bakteriální polysacharidy serogicheskih testy se zahřeje ve vodní lázni po dobu 3 minut.

Aktuální laboratorní testování mozkomíšního moku (analytická fáze) se provádí v souladu s pravidly přijatými v klinické laboratoři v analýze všech biologických tekutin, a zahrnuje následující kroky:

- makroskopické analýza - posouzení vlastností fyzikálně-chemických (velikost, barva, znak)
- počítáním počtu buněk,
- Mikroskopie nativního příprava a cytologie barevné preparata-
- biochemický výzkum,
- mikrobiologické vyšetření (pokud je uvedena).

Považujeme za vhodné a informativní v některých případech doplnit studii o imunologické SSR a případně - dalších testů, jehož význam je popsána v literatuře.

Dekódování výkon CSF

Normální bezbarvý CSF a porozrachna (jako destilovaná voda, ve srovnání s jejich fyzikální vlastnosti obecně popsat CSF).

Šedá nebo šedozelené likér je obvykle způsobena příměsí bakterií a leukocytů. Červená CSF různou intenzitou (eritrohromiya) poháněné příměsí erytrocytů vyskytující se, když čerstvý krvácení nebo poranění mozku. Vizuálně pristutstvuyut erytrocytů je zjištěna, když obsah větší než 500-600 ul.

V patologických procesů může být kapalný ksantohromnoy - barevné v žluté nebo žlutohnědé produktů rozpadu hemoglobinu. Také zvažte xanthosis falešný - barevný likér způsobené léky. Méně často se setkáváme s nazelenalý CSF (hnisavý zánět mozkových blan, mozku absces). V literatuře se popisuje barvu a korchnevy alkohol - útěk kraniofaryngiom cysty v mozkomíšním dráze tekutiny.

Zákal louhu může být v důsledku nečistot krevních buněk nebo mikroorganismů. V posledně uvedeném případě se zákal může být odstraněna centrifugací. Když je obsah v CSF zvyšuje množství hrubých bílkovin se stává opalescentní.

Relativní hustota mozkomíšního moku získané lumbální punkce, 1,006-1,007. Když zánět mozkových blan, traumatem mozku relativní hustoty mozkomíšního zvyšuje tekutiny do 1,015. To snižuje s nadprodukcí mozkomíšního moku (hydrocefalus).

Při zvýšené hladiny fibrinogenu v CSF je vytvořen fibrinových film nebo sraženinu, která se vyskytuje častěji v tuberkulózní meningitidy. Někdy je trubka s kapalinou se nechá stát při pokojové teplotě po dobu jednoho dne (pokud je to nutné k přesnému nastavení? - Ještě film vytvořený). V přítomnosti fibrinózní jeho filmu dissezierující jehly se přenese na podložní sklíčko a obarveny Ziehl-Neelsen nebo jiného způsobu identifikace mykobakterie. Normální CSF 98-99% vody.

Nicméně, studie o jeho chemické složení je důležitým úkolem. To zahrnuje stanovení hladiny proteinu, glukózy a chlorid, a je doplněn dalšími ukazateli v řadě případů.

Protein v mozkomíšním moku

Více než 80% z bílkovin SSR z plazmy teče ultrafiltrací. Obsah proteinu normy v různých dávkách: ventrikulární - ,05-,15g / l, cisternal 0,15-0,25 g / l, bederní 0,15-0,35g / l. Pro stanovení koncentrace proteinu v mozkomíšním moku může být použit některý z normalizovaných metod (s kyselinou sulfosalicylovou a síran amonný, a další). Zvýšený obsah proteinů v mozkomíšním moku (giperproteinarhiya), může být v důsledku různých patogenních faktorů (tabulka 1).

Studium CSF umožňuje nejen objasnit podstatu patologického procesu, ale také posoudit stav hematoencefalické bariéry. Indikátor pro tyto účely může být albumin, za předpokladu, že hladina v CSF je určena imunochemických metod. Stanovení albuminu je prováděna v souvislosti s tím, že, jak se krevní protein není syntetizován lokálně, a proto může být jen „marker“ imunoglobuliny infiltrované z krevního toku v důsledku poruchou bariéry permeability. Simultánní stanovení albuminu v séru (plazma) krve a CSF albumin nám umožňuje výpočet indexu:

Když je intaktní hematoencefalickou bariérou, tento index je nižší než 9, s mírným poškozením - 9-14, s patrný - 14-30, s těžkým poškozením - 30-100, a zvýšení o více než 100 ukazuje na úplnou poruchu bariéry.

V posledních letech se zvýšila zájem specifický pro CNS proteiny louhu - neuron enolázy, S-100 protein, myelinový bázický protein (MBP), a další. Jedním z nejslibnějších z nich pro klinické účely Zdá se, že MBP. V normálním CSF je prakticky chybí (jeho koncentrace nepřesahuje 4 mg / l), a zobrazí se pouze za patologických podmínek. Tato laboratoř funkce není specifická pro určité klinické jednotky, ale odráží velikost léze (většinou spojené se zničením bílá pevná látka). Někteří autoři to slibný definice MBP v mozkomíšním moku ke sledování neuroAIDS zvážila. Bohužel, dnes přetrvávají problémy spojené s přímým stanovení koncentrace proteinu.

Glukózy v mozkomíšním moku

Glukóza se nachází v normálním mozkomíšním moku v koncentraci 2.00-4.18 mmol / l. Tato hodnota je spojena se značnými výkyvy i u zdravých lidí, v závislosti na jídlo režimu, fyzické aktivitě a dalších faktorech. Přesné vyhodnocení hladiny glukózy v mozkomíšním moku současně určit jeho hladiny v krvi, kde se normálně je 2 krát vyšší. Zvýšené hladiny glukózy v krvi (giperglikoarhiya) se vyskytuje u diabetes mellitus, akutní encefalitida, ischemické poruchy prokrvení a dalších nemocí. Gipoglikoarhiya vidět s meningitidou různých etiologií, nebo aseptických zánětů, neoplastických lézí mozku a membrány, nejméně - s herpes infekcí, subarachnoidálního krvácení.

Některé výhoda oproti glukózy jako diagnostický marker je laktát (kyselina mléčná), jak je jeho koncentrace v mozkomíšním moku (2/1-01/2 mmol / l), je nezávislý na které v krvi. Jeho úroveň je významně zvýšena v různých stavů spojených s poruchou metabolismu energie - meningitida, a to zejména - způsobené gram-pozitivními flóry, mozkové hypoxie a některé další.

Chloridy v mozkomíšním moku

Chloridy - obsah v normálním mozkomíšním moku - 118-132 mmol / l. Zvýšená koncentrace v CSF je pozorována v rozporu s jejich odstranění z těla (ledviny, srdce), degenerativních onemocnění a nádorů CNS. Snížení obsahu chloridů je označena s encefalitidou a meningitida.

Enzymy v mozkomíšním moku

Alkoholické nápoje se vyznačuje nízkou aktivitou enzymů v něm obsaženy. Změna aktivity enzymu v mozkomíšním moku v různých onemocnění jsou obecně nespecifické a paralelní popsané posuny v krvi u těchto onemocnění (tabulka 2). Odlišný přístup si zaslouží interpretaci změny v aktivitě kreatinfosfokinázy (CPK). Tento enzym v tkáních tří frakcí, které se vyznačují nejen molekulárními rozdíly, ale také povaha distribuce v tkáních: CK-MB (myokardu), CK-MM (sval), CK-BB (mozek). V případě, že celková aktivita CK v CSF nemá základní diagnostickou hodnotu (může být zvýšena, když nádor, mozkový infarkt, epilepsie a další nemoci), frakce CK-BB je relativně specifický marker poškozené mozkové tkáně a jeho činnost v CSF je v korelaci s Glasgow měřítku.

Počet buněk a mozkomíšní tekutiny cytogramu

Ve studii biologických kapalin a CSF, včetně typicky spočítat počet buněk v cytogramu a šmouhy obarví azureozinom (Romanowského-Giemsa Nocht, Pappenheim). Počítání buněk prvků v mozkomíšním moku (stanovení cytosis) vyrobené za použití Fuchs-Rosenthal komoru, pre-chov to Samson činidla 10 krát. Používání jen vzhledem k tomu, barvivo, spíše než jakýkoli jiný. To umožňuje buňkám, aby skvrny po dobu 15 minut a buňky zachovat nezměněné na 2 hodiny.

Počet buněk v celé buňky se dělí o 3 takto získaného cytosis v 1 ul. Pro větší přesnost, za počtu buněk ve třech komorách. Když může Fuchs-Rosenthal komora absence Goryaeva použití fotoaparátu, počítáním buněk napříč mřížkou jako ve třech komorách, výsledek se násobí 0,4. Doposud existují rozdíly v jednotkách počtu buněk - počet buněk v komoře, v 1 mm nebo 1 litr. Pravděpodobně je to účelné, nicméně vyjádřit počet buněk v cytosis mikrolitrů. Pro výpočet počtu bílých krvinek a červených krvinek v CSF mohou být použity a automatizované systémy.

Zvýšený obsah buněk v mozkomíšním moku (pleocytózou) se často objevuje u zánětlivých onemocnění, v menší míře - s meningeální podráždění. Nejprominentnější pleocytóza viděn s bakteriálními infekcemi, plísňové poškození mozku a tuberkulózní meningitidy. V epilepsie, arachnoiditidy, hydrocefalus, degenerativní procesy, a některých jiných chorob počtu centrálního nervového systému buněk zůstává normální.

Barvení buněk nativní preparát činidlo Samson umožňuje dostatečně spolehlivě diferencovaných buněk. Ale přesnější jejich morfologické vlastnosti dosaženo po fixaci a barvení cytologických přípravků připravených. Moderní přístup k přípravě těchto produktů zahrnuje použití cytospin. Avšak i ve Spojených státech, které mají pouze 55% laboratoří. Proto se v praxi, je mnohem jednodušší způsob - ukládání buněk na podložní sklíčko. Přípravky by měly být dobře suší na vzduchu a pak se natírat.

Obarvené vzorky jsou počet buněk prvky. Ty jsou reprezentovány především krevní buňky (obvykle - lymfocyty a neutrofily, přičemž alespoň - monocytů, eosinofilů, bazofilů) mohou setkat v plazmě a žírné buňky, makrofágy, zrnité kuličky (degenerativní tvoří speciální typ makrofágů - lipofagov schopen tukové degenerace), buňky arahnoendoteliya, epindimy , Morfologie těchto buněčných elementů jsou obecně dobře známé lékařům a laboratorní diagnostika je podrobně popsán v mnoha učebnicích. Úroveň a povaha cytogramu pleocytózou CSF umožňuje určit povahu patologického procesu (tabulka 3).

Leukocytóza často doprovázeno akutní infekce (lokální a difuzní meningitida). CSF eozinofilie je vzácný - je-li mozek echinokokóza, eozinofilní meningitida. CSF eozinofilie nekoreluje zpravidla s počtem eosinofilů v krvi. Lymfocytární pleocytóza CSF se vyskytuje v virová meningitida, roztroušená skleróza, chronické fáze tuberkulózní meningitidy po operacích na mozkových membránách. V patologických procesů CNS pozorovat polymorfismus lymfocytů, mezi kterými jsou aktivovány. Jsou charakterizovány přítomností bohatou cytoplazmou s jednotlivými bledě azurofilních granulích, některé buňky otshnurovku nebo fragmentace cytoplazmě (clasmatosis). Plazmatické buňky se objeví v cytogramu na virovou nebo bakteriální meningitidy, subakutní zánětlivých procesů, při zotavení z neurosyfilis. Monocyty procházejí degeneraci v mozkomíšním moku rychlejší lymfocytů pozorovaných u roztroušené sklerózy, progresivní panencefalitidy, chronický zánět doutnajícím. Makrofágy - „zřízenci“ likér, objeví se krvácení, infekce, traumatické a ischemické nekrózy.

Někdy CSF zjištěno abnormální buňky - prvky, které podle jejich morfologických vlastností nelze přičíst specifických buněčných forem. Atypické buňky se nacházejí v chronických zánětlivých procesech (tuberkulózní meningitida, roztroušená skleróza, atd.), A často jsou nádorové buňky. Pravděpodobnost najde rakovinných buněk v mozkomíšním moku v mozkových nádorů je nízká (méně než 1,5%). Detekce blastových buněk v mozkomíšním moku u hematologických malignit naznačuje neuroleukemia.

Analýza složení louhu je důležité vyhodnotit poměr bílkovin a buněčných elementů (disociace). Když buňka-protein disociace poznamenat pleocytóza vyjádřené na normální nebo mírně zvýšeným obsahem bílkovin. To je typické pro meningitidu. Belkovokletochnaya disociace vyznačující giperproteinarhiey normální cytosis. Tato podmínka je typické pro procesy stojatých v mozkomíšním drah proudění (nádoru, arachnoiditidy et al.).

Klinických situacích někdy vyžadovat počítání počtu erytrocytů v krvavé mozkomíšním moku (pro objem objectification krvácení). Počítání červených krvinek, jsou stejně jako v krvi. Jak je uvedeno výše, se louh barva změní-li v 1 mm obsahuje více než 500 až 600 erytrocyty patrné barvení provádí v přítomnosti asi 2000, a když se stane hemoragické hladinu červených krvinek vyšší než 4000 / L.

Mikrobiologické vyšetření mozkomíšního moku

Jedním z nejčastějších onemocnění centrálního nervového systému je hnisavý meningitidy. V takových případech zvláštní naléhavosti mikorobiologicheskoe studie. To zahrnuje orientační test - bacterioscopy drogy a kultury techniky klasické. Bacterioscopy likér má omezenou diagnostickou hodnotu, a to zejména pro přípravu transparentní CSF. Stěr připravena z kalové vody, získané odstředěním okarshivayut methylenové modři nebo barvení podle Grama, i když někteří autoři se domnívají, že nejnovější verze barvy „trauma“ vytvořené prvky a vytváří artefakty. Když meningitida a abscesy nalezeny rozmanité flóry odpovídající povaze onemocnění. Bez ohledu na výsledky mikroskopie bakteriální meningitidy diagnózy musí být potvrzena kultivačním testem, který se stává rozhodujícím faktorem v diagnostice této skupiny onemocnění a výběru vhodného terapii. To se provádí v souladu s vyhláškou № 375 Ministerstva zdravotnictví Ruské federace 23.12.98 „On opatření k posílení dohledu a prevenci meningokokové infekce a hnisavou bakteriální meningitidy.“ Nejčastější příčinou bakteriální meningitidy je gram-negativní diplokok Neisseria meningitidis, který je možno detekovat 80% případů, i když mikroskopie.

CSF mikroskopie

Za normálních okolností, v mozkomíšním moku jsou přítomny pouze lymfocyty a monocyty. V různých nemocí a patologických stavů v mozkomíšním moku se mohou objevit i jiné typy buněk.

Lymfocyty jsou podobné velikosti na červené krvinky. Lymfocyty mají velké jádro a úzký lem cytoplazmy bez nátěru. Za normálních okolností, v mozkomíšním moku obsahuje 8-10 lymfocyty. Jejich počet je v nádory centrálního nervového systému, zvyšuje. Lymfocyty se vyskytují u chronických zánětlivých procesů v plášťů (tuberkulózní meningitidy, tsistitserkoznom arachnoiditidy).

Plazmatických buněk v mozkomíšním moku. Buňky větší než lymfocyty, velké jádro, umístěný excentricky, velké množství cytoplasmy s relativně malým množstvím jader (velikost buněk - 6,12 mm). Plazmatických buněk v mozkomíšním moku se nacházejí jen v patologických případech není trvání současných zánětlivých procesů v mozku, tak i blány, s encefalitidou, tuberkulózní meningitidy, arachnoiditidy tsistitserkoznom a jiných onemocnění v pooperačním období, kdy pomalého hojení ran.

Látkové monocyty v mozkomíšním moku. velikost pórů - od 7 do 10 um. V normálním kapaliny může někdy nastat jako jednotlivé kopie. Monocyty se nacházejí v mozkomíšním moku po operaci na centrální nervovou soustavu, s dlouhým současným zánětlivým procesům ve skořápkách. Přítomnost tkáně monocytů říká o reakci aktivního tkání a normální hojení ran.

Makrofágy v mozkomíšním moku. Může mít jádra různých tvarů, obvykle se nachází na obvodu jádra buněk cytoplasmě obsahuje vakuoly a inkluze. V normálním makrofágů SSR nenastane. Přítomnost makrofágů v normální počet buněk v mozkomíšním moku byl pozorován po krvácení nebo zánětu. Obvykle se vyskytují v pooperačním období, které má prognostický význam a hovoří o aktivity čištěného roztoku.

Zrnité míče do mozkomíšního moku. Buňky s mastnou infiltrace - s přítomností makrofágů v cytoplasmě tukových kapének. V barvených přípravků mozkomíšního buněk tekutiny mají malé periferně umístěný jádru a cytoplazmě hrubý. Hodnota buňky se liší a závisí na zahrnutých kapiček tukem. Granulované koule nalezené v patologické tekutiny získané z mozku cyst v ložiskách kolapsu mozkové tkáně v nádorech.

Neutrofily v mozkomíšním moku. Kamera je identický ve formě neutrofilů periferní krve. Přítomnost neutrofilů v CSF i v minimálním množství, nebo indikují, k prvnímu, nebo které mají zánětlivou reakci. Přítomnost pozměněných neutrofilů označuje útlum zánětlivého procesu.

Eosinofily v mozkomíšním moku. Stanovena v mozkomíšním moku, které mají jednotný, lesklé zrna. Eosinofily se vyskytují v subarachnoidálního krvácení, meningitida, tuberkulóza a syfilis mozkových nádorů.

Epitelové buňky v mozkomíšním moku. Epitelové buňky, omezují subarachnoidální prostor, se nacházejí v mozkomíšním moku zřídka. Toto velké kulaté buňky s malou kruhový nebo oválný jádry. Se nacházejí v nádorech, někdy se zánětlivými procesy.

Nádorové buňky a komplexy v CSF. Ty se nacházejí v buňce a obarví přípravu roztoku. Maligní buňky mohou být z těchto typů nádorů:

•  meduloblastom;
•  spongioblastoma;
•  astrocytom;
•  rakovinu.

Krystaly v louhu. Nachází se v mozkomíšním moku zřídka, pokud nádor dezintegrace.

Prvky Echinococcus v likvore- háčky scolexes, chitinové fragmenty shell - v mozkomíšním moku jsou vzácné.

PCR diagnostika louh

V posledních letech, některé příslib etiologických diagnostických neuroinfekcí spojené s rozvojem molekulárně genetických technik pro detekci nukleových kyselin z infekčních agens v mozkomíšním moku (PCR diagnostika).

To znamená, že kapalina je středně jasně reagující na patologických procesů v centrálním nervovém systému. Hloubka a charakter jeho změny jsou vzhledem k hloubce patofyziologických poruch. Správné laboratorní vyšetření liquorologic příznaků pomáhá objasnit diagnózu a pro vyhodnocení účinnosti léčby.